研究摘要

     本研究的目的是阐明CADASIL小血管疾病的早期白质改变。

采用高压冷冻和冷冻替代（HPF/FS）技术，结合高分辨率电镜（EM）、免疫组织化学和共聚焦显微镜对4 ~ 15月龄的CADASIL 小鼠脑标本进行对照和对研究胼胝体白质病变。

首先对高压冷冻/冷冻替代（HPF/FS）方案进行了优化。在该方案中，样品通过化学预固定处理后，被嵌入含有20%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）的样品载体中进行冷冻，并在由单宁酸、四氧化锇和醋酸铀酰溶解于丙酮的混合溶液中完成冷冻替代。

随后的电子显微镜（EM）分析表明，CADASIL小鼠从6月龄开始出现髓鞘层分裂现象，且小口径轴突内的舌状结构显著增大；至15月龄时，舌状结构内出现囊泡化，同时伴随髓鞘厚度的明显减薄。免疫组织化学分析显示，少突胶质细胞前体细胞的数量在老年CADASIL小鼠中有所增加，然而，在任何年龄段，成熟少突胶质细胞的数量均未见减少。

此外，Iba1阳性的小胶质细胞数量仅在老年CADASIL小鼠中显著增加，而在年轻小鼠中无明显变化。值得注意的是，激活的小胶质细胞（Iba1和CD68双阳性）数量在所有年龄段均保持不变。

本实验高压冷冻方案采用法国CryoCapCell公司的HPM Live μ 活细胞光电联用高压冷冻系统。仅需1.26秒，即可完成样品在光镜观察到高压冷冻固定的转移，获取真实的CLEM图像。

实验效果对比